目地 創(chuàng)建黃蛭益腎膠襄HPLC指紋識別圖普，選用指紋圖譜并融合有機化學(xué)計算機視覺技術(shù)性對黃蛭益腎膠襄開展質(zhì)量管理。方式 選用Waters XBridge®Shield RP18(250 mm×4.6 mm,5μm)離子交換柱，以乙腈-0.05%硫酸銨溶液為流動性相，梯度方向過柱，容積總流量1.0 mL/min，柱溫30℃，檢驗光波長210 nm。選用HPLC串連四極桿航行時間質(zhì)譜分析（HPLC-Q-TOF-MS/MS）對一共有峰定性研究，選用聚類（HCA）、主成分分析法（PCA）及偏最小二乘法-判別分析（PLS-DA）數(shù)據(jù)分析。結(jié)果 16批試品中國共產(chǎn)黨校準(zhǔn)24個一共有峰，相似性點評均超過0.9，評定了在其中24個峰并屬于7種藥；HCA及PCA鑒別方法將試品分成3類；PLS-DA挑選出包含黃芩異黃烷苷、人參皂甙Rg1、毛蕊大豆異黃酮葡萄糖水苷、7,2'-二甲基-3',4'-二叔丁基異黃烷、松香醇二葡萄糖水苷、毛蕊大豆異黃酮、芒柄花黃素、綠原酸以內(nèi)的8種關(guān)鍵差別成份。結(jié)果 創(chuàng)建的HPLC指紋圖譜可較大水平體現(xiàn)黃蛭益腎膠襄的藥味構(gòu)成信息內(nèi)容，較全方位體現(xiàn)其品質(zhì)，運用的點評剖析技術(shù)性可有效點評其品質(zhì)差別并精確找尋出差別成份，為其品質(zhì)有效調(diào)節(jié)和規(guī)范健全帶來根據(jù)。

黃蛭益腎膠襄由黃芩、水蛭、枸杞、川牛膝、鹽車前子、淮山藥、薏米仁、沙參、墨旱蓮、菟絲子、三七、益母草顆粒、北沙參、蟬蛻、紫河車15味中藥材構(gòu)成，依據(jù)知名腎炎學(xué)者鄒云翔專家教授獨創(chuàng)性的經(jīng)歷方特制而成，作用補氣血滋陰、健脾胃益腎、化淤利濕，用以輕、輕中度漫性繼發(fā)性通用型慢性腎炎的氣陰兩虛或兼具氣滯血瘀，水液證者。黃蛭益腎膠襄藥味諸多，特性各不相同，成分繁雜，該中藥制劑現(xiàn)階段的分析關(guān)鍵在醫(yī)學(xué)運用層面，欠缺對其質(zhì)量管理層面的科學(xué)研究。現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容簡易，質(zhì)量管理不全方位，方式也比較落伍，定量分析指標(biāo)值單一，不可以表現(xiàn)黃蛭益腎膠襄的總體有機化學(xué)構(gòu)成，無法對藥物開展全方位的質(zhì)量管理，那樣必然危害臨床用藥的實效性。

中藥材指紋圖譜的特性包含全面性、特征及可細(xì)化等層面，突顯中藥材的詳細(xì)外貌，在科學(xué)研究中藥材相關(guān)成分、操縱中藥材品質(zhì)及其辨別層面的功能更加突顯。有機化學(xué)計算機視覺技術(shù)性可將指紋圖譜信息內(nèi)容功效系數(shù)法，客觀性體現(xiàn)中藥材品質(zhì)信息內(nèi)容，包含聚類（HCA）、主成分分析法（PCA）、判別分析（DA）和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)技術(shù)性（ANN）等，是一種合理點評中藥材品質(zhì)的方式 。中藥材指紋圖譜融合有機化學(xué)計算機視覺，是中藥材真假辨別、品質(zhì)評估的強有力方式，早已普遍使用于中草藥及中藥制劑的質(zhì)量管理層面。本科學(xué)研究初次選用HPLC創(chuàng)建黃蛭益腎膠襄的指紋圖譜，運用HPLC-Q-TOF-MS/MS對其一共有成份開展定性研究，并融合HCA、PCA、和PLS-DA對其實現(xiàn)品質(zhì)評估并發(fā)覺導(dǎo)致不一樣批號間品質(zhì)不同的要素，為黃蛭益腎膠襄質(zhì)量管理和健全產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)打下基礎(chǔ)。

1 原材料

高效率液相色譜Ulti Mate3000（英國賽默飛世爾高新科技有限責(zé)任公司）；Agilent 1290高效率液相色譜（英國安捷倫公司）；Bruker四級桿航行時間質(zhì)譜儀器（法國布魯克企業(yè)）；XSE105型電子分析天平（法國梅特勒-托利多企業(yè)）；Thermo Heraeus Multifuge X3離心脫水機（英國賽默飛世爾高新科技有限責(zé)任公司）；KUDOS超聲波清洗器（上海市科導(dǎo)超聲波儀器設(shè)備有限責(zé)任公司）；Milli-Q®型超純水儀（英國密理博企業(yè)）。

標(biāo)準(zhǔn)品：松香醇二葡萄糖水苷（生產(chǎn)批號111537-20160501，質(zhì)量濃度≥91.7%），購自我國食品藥品安全檢驗研究所；7,2'-二甲基-3',4'-二叔丁基異黃烷（生產(chǎn)批號Y28M10H84303，質(zhì)量濃度≥98%）、黃芩異黃烷苷（生產(chǎn)批號Y08S8H43409，質(zhì)量濃度≥98%）、美迪紫檀木苷（生產(chǎn)批號P21N9F75533，質(zhì)量濃度≥98%）、毛蕊大豆異黃酮葡萄糖水苷（生產(chǎn)批號Y27F9H54731，質(zhì)量濃度≥98%）、芒柄花苷（生產(chǎn)批號R28O8F46957，質(zhì)量濃度≥98%）、毛蕊大豆異黃酮（生產(chǎn)批號Y24N9Y75652，質(zhì)量濃度≥98%），均購自上海源葉生物技術(shù)有限責(zé)任公司；芒柄花黃素（生產(chǎn)批號MUST-18033005，質(zhì)量濃度≥99.03%），購自成都市曼斯特生物技術(shù)有限責(zé)任公司。工業(yè)甲醇、乙腈、苯甲酸為色譜純；硫酸銨為分析純；水為超純水系統(tǒng)。

黃蛭益腎膠襄16批試品、藥方中每種藥的原中藥材（經(jīng)蘇州藥物產(chǎn)品質(zhì)量檢測研究所閔春艷負(fù)責(zé)人中藥師評定達(dá)標(biāo)）、缺單種藥的黃蛭益腎膠襄呈陰性試品均由蘇州雷允上醫(yī)藥有限責(zé)任公司給予。16批試品序號S1～S16，相對應(yīng)生產(chǎn)批號各自為OC26002、PC26002、QC26001、RC26003、RC26004、RC26005、RC26006、RC26007、RC26008、RC26009、RC26010、RC26011、SC26001、SC26005、SC26006、SC26007。

2 方式

2.1 色譜儀標(biāo)準(zhǔn)

以Waters XBridge®Shield RP18(250 mm×4.6 mm,5μm）為離子交換柱；流動性相為乙腈（A)-0.05%硫酸銨水（B）；梯度方向過柱程序流程：0～5 min、5%A,5～85 min、5%～45%A；容積總流量1.0 mL/min；柱溫30℃；氣相容積10μL；檢驗光波長210 nm。

2.2 質(zhì)譜分析標(biāo)準(zhǔn)

選用電噴霧器離子源（ESI），正、空氣負(fù)離子逐行掃描，掃描儀范疇m/z 50～1 500，干躁氣溫度180℃，空氣干燥器容積總流量6 L/min，電子煙霧化器工作壓力150 k Pa，毛細(xì)血管工作電壓4.5 k V，裂化工作電壓500 V，撞擊動能35.0 e V。

2.3 水溶液的制取

2.3.1 供試品水溶液的制取

高精密稱取本產(chǎn)品粉末狀約2 g，置具塞錐形瓶中，加工業(yè)甲醇20 m L，超聲波解決（輸出功率100 W，頻率52 k Hz)30 min，取下，放冷，上清液過0.45μm的濾紙，取續(xù)滲瀝液，即得。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)品水溶液的制取

取松香醇二葡萄糖水苷、7,2'-二甲基-3',4'-二叔丁基異黃烷、黃芩異黃烷苷、美迪紫檀木苷、毛蕊大豆異黃酮葡萄糖水苷、芒柄花苷、毛蕊大豆異黃酮、芒柄花黃素適當(dāng)，高精密稱取，加工業(yè)甲醇做成濃度值分別為18.00、8.40、21.20、8.40、20.08、15.94、29.28、16.92 mg/L的混和標(biāo)準(zhǔn)品水溶液。

2.3.3 中藥材水溶液的制取

取黃芩、水蛭、枸杞、川牛膝、鹽車前子、淮山藥、薏米仁、沙參、墨旱蓮、菟絲子、三七、益母草顆粒、北沙參、蟬蛻、紫河車各2 g，同“2.3.1”項下方式制取簽單種藥供試品水溶液。

2.3.4 缺單種藥的呈陰性試品溶劑的制取

各自取缺單味藥的呈陰性試品2 g，同“2.3.1”項下方式制作成呈陰性試品水溶液。

2.4 方法學(xué)調(diào)查

2.4.1 精度實驗

按“2.3.1”項下邊法紀(jì)得供樣品水溶液（S1），按“2.1”項下色譜儀標(biāo)準(zhǔn)，持續(xù)氣相6次測量。以16號峰毛蕊大豆異黃酮為參考峰，測算各一共有峰的相對性保存期和相對性峰總面積RSD<0.38%、3.97%，說明儀器設(shè)備精度優(yōu)良。

2.4.2 可重復(fù)性實驗

按“2.3.1”項下邊法紀(jì)得供樣品水溶液（S1)6份，按“2.1”項下色譜儀標(biāo)準(zhǔn)氣相測量。以16號峰毛蕊大豆異黃酮為參考峰，測算各一共有峰的相對性保存期和相對性峰總面積RSD<0.24%、4.35%，說明方式可重復(fù)性優(yōu)良。

2.4.3 可靠性實驗

按“2.3.1”項下邊法紀(jì)得供樣品水溶液（S1），按“2.1”項下色譜儀標(biāo)準(zhǔn)，各自在0、3、6、12、18、24 h氣相測量。以毛蕊大豆異黃酮為參考峰，測算各一共有峰的相對性保存期和相對性峰總面積RSD<0.24%、4.57%，說明試品在24 h內(nèi)平穩(wěn)。

2.4.4 耐用度實驗

取同一批試品水溶液（S1），各自選擇同一離子交換柱Waters XBridge®Shield RP18(250 mm×4.6 mm,5μm）的不一樣生產(chǎn)批號氣相，生產(chǎn)批號各自為0135383132、0136392001、0137392827，按“2.1”項下色譜儀標(biāo)準(zhǔn)氣相測量。以毛蕊大豆異黃酮為參考峰，測算各一共有峰的相對性保存期和相對性峰總面積RSD<0.39%、6.94%。